小鼠elisa檢測試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
實驗原理:
將目標抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結合,然后加入微生物化的目標抗體,將未結合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
性能:
1、特異性:不與其它細胞因子反應。
2、重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
3、靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
小鼠elisa檢測試劑盒的常見問題解析:
1、加樣量不一致?
解決方法:樣品稀釋前應充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。
2、樣品數(shù)量多少不一,加樣時間有長有短?
解決方法:重復某一樣品時,加樣時間盡可能與第1次接近。
3、保溫時間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致?
解決方法:重復測定標本,操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性。