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豬ELISA檢測試劑盒基本原理與蔗糖封閉原理分析

發(fā)布時間:2021-04-25   點擊次數(shù):1454次
  豬ELISA檢測試劑盒基本原理:
 
 ?、倏乖蚩贵w能吸附到固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;
 
  ②抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
 
  ③酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
 
  豬ELISA檢測試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
 
  1、實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;
 
  2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
 
  3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑"的作用。
 
  4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
 
  封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
 
  封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會影響。
 
  tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-
 
  豬ELISA檢測試劑盒實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?br /> 
  (1) ELISA實驗包被緩沖液;
 
  (2) ELISA實驗洗滌緩沖液;
 
  (3) ELISA實驗稀釋液;
 
  (4)ELISA實驗終止液;
 
  (5)ELISA底物緩沖液;
 
  (6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液;
 
  (7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC;
 
  值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。
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